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【摘要】 目的 觀察大鼠局灶腦缺血外周血及腦組織一氧化氮的變化及腦梗通對(duì)NO表達(dá)的影響。方法 采用血管內(nèi)栓線阻斷法建立右側(cè)大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血（MCAO）模型，應(yīng)用熒光分光光度法測(cè)定NO的表達(dá)。結(jié)果 大鼠MCAO后4h，血漿和缺血側(cè)腦組織NO仍明顯低于假手術(shù)組，至MCAO后24h，血漿和缺血側(cè)腦組織NO含量已有升高，并接近假手術(shù)組水平;腦梗通可升高大鼠MCAO后4h、24h血漿和腦組織中的NO含量，且有時(shí)相差異，至24h時(shí)血漿和腦組織中的NO含量均明顯高于模型組，并接近假手術(shù)組。結(jié)論 腦缺血早期NO表達(dá)減少，腦梗通口服液能有效升高NO的表達(dá)，可能是其治療急性腦梗塞的重要藥理機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞 腦缺血一氧化氮 腦梗通

一氧化氮在腦梗塞中的作用具有雙重性，一般認(rèn)為，在低濃度時(shí)，起著擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集、抑制細(xì)胞浸潤(rùn)、粘附等生理作用，從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，而在高濃度時(shí)，則產(chǎn)生神經(jīng)細(xì)胞損傷的毒性作用。我們通過臨床研究已證實(shí)腦梗通口服液治療急性腦梗塞患者具有較好的療效。本研究觀察了大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞后NO的表達(dá)變化及中藥腦梗通對(duì)其影響，以探討腦梗通治療急性腦梗塞的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 選用Wistar二級(jí)雄性大鼠，體重250g～350g（由中國(guó)生物制品鑒定所提供）。將動(dòng)物隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組、模型組、腦梗通組，模型組、腦梗通組又分MCAO后4h組和24h組兩組，每組10只大鼠。

1.2 給藥方法 按人與大鼠體表面積換算公式計(jì)算，腦梗通組，給于腦梗通口服液（1ml/100g·d，本院藥學(xué)部制劑室提供）;模型組，給予生理鹽水（1ml/100g·d）。以上各組除假手術(shù)組外，均按每日劑量要求分上下午2次灌胃，連續(xù)5d后造模。

1.3 大鼠急性局灶性腦缺血模型的制備及鑒定 采用血管內(nèi)拴線阻斷法阻斷右側(cè)大腦中動(dòng)脈 ［1］ 。假手術(shù)組同樣進(jìn)行麻醉、皮膚切開、血管分離后，不夾閉血管及插入栓線，直接縫合皮膚。大腦中動(dòng)脈血管內(nèi)栓線造成右側(cè)Horner’s綜合征，參照Zea Longa評(píng)分法 ［2］ ，于大鼠清醒后進(jìn)行評(píng)分，分五級(jí)0～4分。0分:無神經(jīng)系統(tǒng)損害癥狀;1分:不能完全伸直左前爪;2分:向左側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分:行走時(shí)向左側(cè)傾斜;4分:不能自發(fā)行走。評(píng)分在2分以上的大鼠用于本實(shí)驗(yàn)。

1.4 血漿及腦組織NO測(cè)定 大鼠達(dá)到缺血時(shí)限后，斷頭缺血1ml，放入肝素抗凝試管內(nèi)，并在低溫下（0℃）迅速取所 需腦組織（內(nèi)側(cè)皮層、顳皮層、海馬）精確稱重，以1:10的比例加入生理鹽水制成腦組織勻漿液。采用熒光分光光度法 ［3］ 測(cè)定血漿及腦組織中NO含量，儀器采用RF-5000型熒光分光光度計(jì)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)均以X±s表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組腦缺血后不同時(shí)相血漿NO含量變化 見表1。

表1 各組腦缺血后不同時(shí)相血漿NO含量

注:與假手術(shù)組比: △ P

由表1可見，大鼠在MACO后4h血漿NO含量顯著低于假手術(shù)組（P0.05）。腦梗通組在MACO后4h血漿NO含量亦降低，但P>0.05;至MACO后24h時(shí)，腦梗通組的NO含量升高差異有顯著性（P

2.2 各組腦缺血后不同時(shí)相患側(cè)腦組織NO含量變化 見表2。

表2 各組腦缺血后不同時(shí)相腦組織NO含量

注:與假手術(shù)組比: △ P

由表2可見，各組腦組織中NO含量均低于假手術(shù)組，但僅模型組在MCAO4h時(shí)顯著降低（P

3 討論

急性腦梗塞屬中醫(yī)“中風(fēng)”范疇，由風(fēng)、火、痰、瘀、虛等病理因素引起氣血逆亂、瘀血阻滯經(jīng)絡(luò)而發(fā)病。急性期以邪氣盛實(shí)為主，治療重心當(dāng)以治標(biāo)為主，以頓挫邪勢(shì)。我們通過觀察研究認(rèn)為，引起瘀血阻滯經(jīng)絡(luò)的成因甚多，如不加以分析，而是概念化的活血化瘀往往可影響療效。腦梗通口服液由川芎、大黃、水蛭、天麻、白蒺藜等藥組成，具有通腑化痰、活血通絡(luò)之效，我們通過臨床研究已證實(shí)腦梗通治療急性腦梗塞患者具有較好的療效 ［4］ 。一氧化氮在腦梗塞中的作用具有雙重性，一般認(rèn)為，在低濃度時(shí)，起著擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集、抑制細(xì)胞浸潤(rùn)、粘附等生理作用，從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，而在高濃度時(shí)，則產(chǎn)生神經(jīng)細(xì)胞損傷的毒性作用。在急性局灶性腦缺血早期，由內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthas一氧化氮含量，eNOS）合成的NO具有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用，由神經(jīng)元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthas天然氣報(bào)警器，nNOS）合成的NO主要認(rèn)為參與了早期的缺血性神經(jīng)元損傷，而在急性局灶性腦缺血中后期，由誘生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synˉthas，iNOS）合成的NO具有神經(jīng)毒性作用，主要參與遲發(fā)性神經(jīng)元損傷 ［5］ 。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，大鼠MCAO后4h，血漿和缺血側(cè)腦組織（內(nèi)側(cè)皮層、顳皮層、海馬）NO仍明顯低于假手術(shù)組，至MCAO后24h，血漿和缺血側(cè)腦組織NO含量已有升高，并接近假手術(shù)組水平。腦梗塞早期NO水平降低的原因考慮有:①腦組織長(zhǎng)時(shí)間缺血使NO合成的底物氧和精氨酸供應(yīng)障礙。②缺血時(shí)血管內(nèi)皮受損及神經(jīng)元損傷使NO合成受到影響。目前認(rèn)為，腦梗塞早期NO的增高更為重要 ［6］ 。 由于腦梗塞早期NO濃度的低下，使其不能發(fā)揮對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，導(dǎo)致腦梗塞早期神經(jīng)細(xì)胞的損傷。另外，實(shí)驗(yàn)顯示血漿NO和腦組織NO水平呈同步變化，表明通過監(jiān)測(cè)血漿中NO含量可基本估計(jì)腦組織中NO含量的變化，對(duì)臨床研究有一定指導(dǎo)意義。

實(shí)驗(yàn)研究顯示，腦梗通可升高大鼠MCAO后4h、24h血漿和腦組織中的NO含量，且有時(shí)相差異，至24h時(shí)血漿和腦組織中的NO含量均明顯高于模型組，并接近假手術(shù)組。說明腦梗通可能通過調(diào)節(jié)NO的變化來發(fā)揮作用，是其治療急性腦梗塞的藥理機(jī)制之一。本研究未檢測(cè)NOS的活性變化，但從時(shí)間推測(cè)，腦梗通可能是通過提高腦梗塞早期eNOS活性，從而發(fā)揮NO的神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用。腦梗通調(diào)控NO表達(dá)的機(jī)制可能為:（1）腦梗通通過活血化瘀、通腑化痰作用，改善微循環(huán)，改善循環(huán)中及腦組織的供血供氧，使NO合成的底物得到一定恢復(fù)。（2）腦梗通具有清除氧自由基、降低過氧化脂質(zhì)的作用 ［4］ ，從而可能進(jìn)一步抑制了NO合成后的降解。

參考文獻(xiàn)

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4 黃柳華，李求兵，張樹益，等.腦梗通1、2口服液治療老年急性腦梗塞142例臨床觀察.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合雜志，1998，11（4）:319-320.

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作者單位:100029北京中日友好醫(yī)院

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